首页
外语
计算机
考研
公务员
职业资格
财经
工程
司法
医学
专升本
自考
实用职业技能
登录
医学
下列蛋白质分离纯化方法中以净电荷不同为依据的是
下列蛋白质分离纯化方法中以净电荷不同为依据的是
admin
2015-08-15
21
问题
下列蛋白质分离纯化方法中以净电荷不同为依据的是
选项
A、等电聚焦电泳
B、SDS-PAGE电泳
C、凝胶过滤层析
D、亲和层析
E、区带离心
答案
A
解析
(1)根据分子大小的纯化方法:
① 透析和超滤透析和超滤:利用蛋白质分子不能通过半透膜的性质,使蛋白质与无机盐、糖等小分子相分离,常用于蛋白质浓缩和脱盐。
②离心:离心是利用蛋白质分子的质量或密度不同而进行分离的方法。在离心场中,蛋白质分子的运动取决于它的密度和形状,沉降系数可以精确地描述其运动特征。利用蔗糖密度梯度离心,可以将混合物分成若干区带,区带中的物质(蛋白质或细胞器)的密度和这一位置的蔗糖密度相当。超速离心获得的离心力可以是重力加速度(g)的6×10
5
倍,超速离心机产生的离心力足以沉淀质量大于10000的微粒。为了降低高速离心产生的高温,离心机转头所在的空间必须高度真空。
③凝胶过滤层析:又称“分子排阻层析”或“分子筛”。凝胶颗粒呈多孔的网状结构,较大的蛋白质分子不能进入孔,只能从颗粒间的缝隙通过,首先洗脱出来;而较小的蛋白质能够进入并穿过孔,路径长,洗脱速度慢。目前经常使用的凝胶有葡聚糖、聚丙烯酰胺和琼脂糖等。
(2)利用溶解度差别的纯化方法:
① 等电点沉淀:蛋白质处于等电点时,同类分子之间的静电斥力消除,因而发生聚集、沉淀。调节蛋白质混合物的pH,如达到某一成分的pI,则这种蛋白质将沉淀,其他蛋白质保留于上清。
②盐析:在蛋白质混合物中大量加入硫酸钠、氯化钠等中性盐,原来作为溶剂的大部分水变成盐离子的水化水,迫使蛋白质的疏水基团暴露出来,蛋白质因疏水作用而聚集、沉淀,最先沉淀的应当是表面疏水基团最多的蛋白质。另外,利用与水互溶的有机溶剂(丙酮、乙醇等)可以使蛋白质在低温下沉淀;在低温下控制温度能够使蛋白质分级沉淀,因为大部分球蛋白的溶解度随温度的升高而增加。
(3)根据电荷不同的纯化方法:
① 电泳:带电颗粒(蛋白质、核酸等)携带的净电荷不同,在电场中向其电性相反的电极移动。根据支持物的不同,电泳分为薄膜电泳、凝胶电泳等。凝胶电泳常用的支持物有琼脂糖和聚丙烯酰胺等。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的分辨率较高,可以将人血清蛋白质分成几十条区带。SDS-PAGE可以分离蛋白质混合物,并且测定蛋白质的相对分子质量。SDS(十二烷基硫酸钠)携带的负电荷比蛋白质的电荷多10倍以上。蛋白质混合物经过SDS处理以后,不仅使蛋白质变性,而且基本上消除了各组分在电荷和形状方面的差异,多肽链的质量成为决定其迁移速度的唯一因素。等电聚焦(IEF)的原理是:在聚丙烯酰胺凝胶中含有两性电解质形成的连续的线性pH梯度,不同的蛋白质将分别“聚焦”在相当于各自pI的位置停止前进,形成一条条狭窄的区带。IEF的分辨率较高,可以分离pI相差0.01pH单位的蛋白质。双向电泳的大致步骤为:首先蛋白质混合物进行IEF,按pI的不同进行分离,然后将凝胶条取出进行SDS-PAGE,电泳方向与IEF垂直,使蛋白质再根据相对分子质量大小分离。双向电泳的优点是分辨率很高,重复性好,可研究细胞蛋白质表达谱。毛细管电泳在内径很细的石英管中进行,以利于散热,其特点是高效、快速和微量。
②离子交换层析:以离子交换树脂作为固定相,其表面含有修饰基团,在中性pH条件下这些基团携带电荷,吸引携带相反电荷的蛋白质分子。利用盐离子浓度梯度,可以将吸附于树脂的蛋白质有选择地洗脱下来。高效液相层析(HPLC)的树脂颗粒很细(直径只有普通树脂的几十分之一),流动相必须借助于高压泵才能获得正常流速,因此大大增加了交换面积,提高了分离效率,分辨率高。所有经典的液相层析均可通过HPIC进行,例如离子交换、凝胶过滤和亲和层析等。
(4)利用对配体的生物亲和力的纯化方法:亲和层析根据蛋白质的生物学特异性(对配体的亲和力)进行分离。如果将抗体(或酶的底物)作为配体共价连接在树脂上,就能使相应的抗原(或者特异的酶蛋白)吸附于亲和层析柱上,而蛋白质混合物中的其他蛋白不能吸附。含有过量配体的洗脱液可以将吸附于层析柱的蛋白质洗脱下来。
转载请注明原文地址:https://jikaoti.com/ti/HPqDFFFM
本试题收录于:
在职(同等学力)考研西医综合题库考研分类
0
在职(同等学力)考研西医综合
考研
相关试题推荐
下列哪项不属于甘味药的作用
有关脾破裂,哪项是错误的
关于脊柱结核,下列哪项错误
用糖皮质激素治疗溃疡性结肠炎时,宜选用主要作用于肠道局部而全身不良反应较小的类型。下列具有此种作用的糖皮质激素为()
肝硬化患者,出现语无伦次,昼睡夜醒,表情欣快。考虑为肝性脑病昏睡期。护士对病人饮食指导不正确的是()
关于小脑的叙述,正确的是
A.蛋白质B.甘油三酯C.葡萄糖D.胆同醇热价最高的营养物质是
A.刺激颈动脉体感受器B.刺激主动脉体感受器C.直接刺激脑桥呼吸调整中枢D.直接刺激延髓呼吸中枢动脉血氧分压降低时引起呼吸加强的主要机制是
关于嗜酸性粒细胞,哪项是错误的
胃底腺壁细胞呈嗜酸性,是由于细胞质内有大量线粒体和发达的滑面内质网。
随机试题
氧解离曲线由正常位置向左移,可见于下列哪种情况?()
土的固结速度与下列哪个指标有关?()
招标工程量清单中某分部分项清单项目与单一计价定额子目的工作内容与计量规则一致,则确定该清单项目综合单价不可或缺的工作是()。
持续督导工作结束后,保荐机构应当在发行人公告年度报告之日起的( )个工作日内向中国证监会、证券交易所报送保荐总结报告书。
在债务重组的会计处理中,以下说法错误的是()。
密度10kg/m3应读作()。
克服和弥补市场失效的问题,只需要公共财政来发挥作用。()
2007年末全国就业人员76990万人,比上年末增加590万人,其中,第一产业就业人员31444万人,占全国就业人员的40.8%;第二产业20629万人,占26.8%;第三产业24917万人,占32.4%。年末城镇就业人员29350万人,比上年末净增加10
一进程在某一时刻具有()。
Thepoliceaskedthe(village)______wherehefoundthelostchild.
最新回复
(
0
)